Bacitracine, complesso di zinco.
Complesso di zinco delle bacitracine [1405-89-6].
» Bacitracin Zinc è il complesso di zinco della bacitracina, costituito da una miscela di polipeptidi antimicrobici, i cui componenti principali sono le bacitracine A, B1, B2 e B3. Ha una potenza non inferiore a 65 Unità di Bacitracina per mg, calcolata su base essiccata. Contiene non meno del 4,0% e non più del 6,0% di zinco (Zn), calcolato su base essiccata.
Imballaggio e stoccaggio- Conservare in contenitori stretti e conservare in un luogo fresco.
Etichettatura-Etichettarlo per indicare che deve essere utilizzato solo nella produzione di farmaci non parenterali. Laddove sia confezionato per la prescrizione di composti, etichettarlo per indicare che non è sterile e che la potenza non può essere garantita per più di 60 giorni dopo l'apertura e per indicare il numero di unità di bacitracina per milligrammo. Laddove è destinato all'uso nella preparazione di forme di dosaggio sterili, l'etichetta indica che è sterile o deve essere sottoposto a ulteriore lavorazione durante la preparazione di forme di dosaggio sterili.
Norme di riferimento USP<11>-
USP Bacitracina Zinco RS
Identificazione-
A: Test di identificazione cromatografica su strato sottile<201BNP>: soddisfa i requisiti.
B: Soddisfa i requisiti della procedura cromatografica liquida nel test di Composizione.
Sterilità<71>-Se l'etichetta indica che è sterile, soddisfa i requisiti quando testato come indicato per la filtrazione su membrana nel test di sterilità del prodotto da esaminare, ad eccezione dell'uso del fluido A a ciascun L del quale sono stati aggiunti 20 g di disodio edetato.
pH<791>: tra 6,0 e 7,5, in una soluzione (satura) contenente circa 100 mg per mL.
Perdita all'essiccazione<731>-Essiccare circa 100 mg in bottiglia con tappo capillare sotto vuoto a 60°C per 3 ore: perde non più del 5,0% del suo peso.
Contenuto di zinco- [nota-Le preparazioni Standard e la preparazione Test possono essere diluite quantitativamente con acido cloridrico 0,001 N, se necessario, per ottenere soluzioni di concentrazioni adeguate, adattabili al range lineare o di lavoro dello strumento. ]
Preparazioni standard-Trasferire 3,11 g di ossido di zinco, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 250-mL, aggiungere 80 mL di acido cloridrico 1 N, scaldare per sciogliere, raffreddare, diluire con acqua a volume e mescolare. Questa soluzione contiene 10 mg di zinco per ml. Diluire ulteriormente questa soluzione con acido cloridrico 0,001 N per ottenere preparazioni standard contenenti rispettivamente 0,5, 1,5 e 2,5 µg di zinco per mL.
Preparazione del test-Trasferire circa 200 mg di zinco bacitracina, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 100-mL. Sciogliere in acido cloridrico 0,01 N, diluire con lo stesso solvente a volume e mescolare. Pipettare 2 mL di questa soluzione in un matraccio tarato da 200-mL, diluire con acido cloridrico 0,001 N a volume e mescolare.
Procedura-Determinare contemporaneamente le assorbanze delle preparazioni Standard e della preparazione Test sulla linea di risonanza dello zinco di 213,8 ​​nm, con uno spettrofotometro di assorbimento atomico adatto (vedere Spettrofotometria e diffusione della luce<851>), dotato di una lampada a catodo cavo-di zinco e una fiamma aria-acetilene, utilizzando acido cloridrico 0,001 N come bianco. Tracciare le assorbanze delle preparazioni standard rispetto alla concentrazione, in µg per ml, di zinco e tracciare la linea retta che meglio si adatta ai tre punti tracciati. Dal grafico così ottenuto determinare la concentrazione, in µg per mL, di zinco nella preparazione del Test. Calcolare il contenuto di zinco, in percentuale, nella porzione di Bacitracina Zinco assunta con la formula:
1000C/W
dove C è la concentrazione, in µg per mL, di zinco nella preparazione del Test; e W è il peso, in mg, della porzione di Bacitracina Zinco assunta.
Composizione-
Buffer- Sciogliere 34,8 g di potassio fosfato bibasico in 1 L di acqua. Aggiustare con 27,2 g di fosfato di potassio monobasico, sciolti in 1 L di acqua, fino a pH 6,0.
Fase mobile-Preparare una miscela di metanolo, acqua, tampone e acetonitrile (26:15:5:2). Mescolare bene e degassare.
Diluente-Sciogliere 40 g di disodio edetato in 1 L di acqua. Regolare con idrossido di sodio diluito fino a un pH di 7,0.
Soluzione di idoneità del sistema - Sciogliere una quantità accuratamente pesata di USP Bacitracin Zinc RS nel diluente per ottenere una soluzione con una concentrazione nominale di circa 2,0 mg per ml.
Soluzione con soglia di segnalazione-Diluire quantitativamente, con acqua, un volume adeguato di soluzione di idoneità del sistema per ottenere una soluzione con una concentrazione nota di 0,01 mg per mL.
Soluzione per l'identificazione dei picchi-Sciogliere una quantità pesata di USP Bacitracin Zinc RS in un volume adeguato di diluente per ottenere una soluzione con una concentrazione nominale di circa 2,0 mg per ml. Scaldare a bagnomaria bollente per 30 minuti. Raffreddare a temperatura ambiente.
Soluzione test-Sciogliere una quantità accuratamente pesata di zinco bacitracina nel diluente per ottenere una soluzione con una concentrazione nominale di circa 2,0 mg per ml.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia<621>)-Il cromatografo liquido è dotato di un rilevatore di assorbanza e di un -capped 4.6- Colonna da 250-mm che contiene un impaccamento L1 da 5-μm. La portata è di 1,0 ml al minuto. Impostare la lunghezza d'onda del rilevatore su 300 nm. Iniettare circa 100 µl della soluzione di identificazione del picco e identificare la posizione della bacitracina F, che è un'impurezza nota, utilizzando il tempo di ritenzione relativo mostrato nella Tabella 1.
Tabella 1
Nome componente Tempo di conservazione relativo (approssimativo)
Bacitracina C1 0,5
Bacitracina C2 0,6
Bacitracina C3 0,6
Bacitracina B1 0,7
Bacitracina B2 0,7
Bacitracina B3 0,8
Bacitracina A 1.0
Bacitracina F 2.4
Cambiare la lunghezza d'onda del rilevatore e impostarlo su 254 nm. Cromatografare la soluzione di idoneità del sistema e registrare le risposte dei picchi come indicato nella Procedura: identificare i picchi dei componenti più attivi della bacitracina (bacitracine A, B1, B2 e B3), i peptidi a eluizione precoce (quelli che eluiscono prima del picco dovuto alla bacitracina B1) e l'impurezza, bacitracina F, utilizzando i valori relativi del tempo di ritenzione forniti nella Tabella 1. Calcolare il rapporto picco-a-valle utilizzando la formula:
HP/alta tensione
in cui Hp è l'altezza sopra la linea di base del picco dovuto alla bacitracina B1; e HV è l'altezza sopra la linea di base del punto più basso della curva che separa il picco della bacitracina B1 dal picco dovuto alla bacitracina B2. Il rapporto picco-to-valle non è inferiore a 1,2.
Procedura-Iniettare separatamente volumi uguali (100 µl) di diluente, soluzione di test e soluzione per la soglia di reporting. Registrare i cromatogrammi per circa tre volte il tempo di ritenzione della bacitracina A. Identificare i picchi utilizzando i relativi tempi di ritenzione mostrati nella Tabella 1. Misurare le aree di tutti i picchi nella soluzione test. [nota-Ignorare qualsiasi picco nella soluzione test avente un'area inferiore all'area del picco della bacitracina A nella soluzione soglia di reporting; ignorare eventuali picchi osservati nel diluente.]
nota-L'area totale nei calcoli seguenti è definita come l'area di tutti i picchi tranne la soglia di reporting.
contenuto di bacitracina a-Calcola la percentuale di bacitracina A utilizzando la formula:
(rA/area totale) × 100
in cui rA è la risposta dell'area dalla bacitracina A. Il contenuto di bacitracina A non è inferiore al 40,0% dell'area totale.
contenuto di bacitracina attiva - Calcolare la percentuale di bacitracina attiva (bacitracina A, B1, B2 e B3) utilizzando la formula:
(rA + rB1 + rB2 + rB3 / Area totale)×100
in cui rA, rB1, rB2 e rB3 sono le risposte dell'area rispettivamente della bacitracina A, B1, B2 e B3. La somma di bacitracina A, B1, B2 e B3 non è inferiore al 70,0% dell'area totale.
limite dei peptidi a eluizione precoce-Calcola la percentuale di tutti i picchi che eluiscono prima del picco dovuto alla bacitracina B1 utilizzando la formula:
(rPreB1 / Area totale) ×100
in cui rPreB1 è la somma delle risposte di tutti i picchi che eluiscono prima del picco della bacitracina B1. Il limite dei peptidi a eluizione precoce (quelli che eluiscono prima del picco dovuto alla bacitracina B1) non è superiore al 20,0%.
limite della bacitracina f- Calcolare la percentuale di bacitracina F utilizzando la formula:
100 × (rF/rA)
in cui rF è la risposta della bacitracina F dalla soluzione Test; e rA è la risposta della bacitracina A dalla soluzione test. Il limite della bacitracina F, un'impurità nota, non è superiore al 6,0%.
Analisi - Procedere con la bacitracina zinco come indicato in Antibiotici - Analisi microbiche 81.