Procedure di ispezione
1. Aspetto
-- Ispezione visiva
2. Purezza (HPLC)
2.1 Strumento
Cromatografia liquida ad alte prestazioni, rilevatore PDA.
Bilancia analitica elettronica
2.2 Reagente
Acetonitrile (grado cromatografico), acido trifluoroacetico (grado cromatografico)
2.3 Condizioni cromatografiche
2.3.1 Colonna: YMC-ODS-AM, 5 μl, 250x4,6 mm
2.3.2 Lunghezza d'onda di rilevamento: INC220nm
Velocità di flusso: 1,0 ml/min
Dimensione del campione: 10 μl (riferimento)
Diluente: acetonitrile
Tempo di raccolta dati: 25.00min
2.4 Preparazione della fase mobile
Fase mobile A (acqua di acido trifluoroacetico allo 0,1%): assorbimento di precisione 2. Diluire l'acido trifluoroacetico Oml con acqua a 2000 m1, mescolare bene e degasare;
Fase mobile B (0,1% acido trifluoroacetico acetonitrile): assorbimento preciso 2,0 ml di acido trifluoroacetico sono stati diluiti a 2000 m1 con acetonitrile, miscelati e degassati;
2.5 Programma gradiente della fase mobile
Tempo (min) A% B%
0,00 90 10
13:00 10 90
18.00 10 90
18.01 90 10
23.00 90 10
2.6 Preparazione della soluzione campione
Pesare e sciogliere 0,1 g di campione con acetonitrile e diluire a 100 ml, agitare bene per l'uso o alla stessa concentrazione. Preparare due campioni in parallelo.
2.7 Determinazione del campione
Analizzare il campione secondo la seguente procedura di campionamento:
Più di 1 iniezione di soluzione in bianco
Soluzione campione per 1 punto 1#
Soluzione campione per 1 punto 2#
2.8 Calcolo dei risultati
2.8.1 Il metodo di normalizzazione dell'area del picco è stato utilizzato per calcolare la purezza dell'HPLC deducendo lo spazio vuoto.
2.8.2 La deviazione media relativa della purezza di due aghi non deve essere superiore all'1%
2.8.3 Se i risultati di entrambe le iniezioni soddisfano i criteri di accettazione, come risultato finale viene presa la purezza media.
3, Punto di fusione -- RY-1 strumento per la determinazione del punto di fusione
4. Metodo di rilevamento della perdita all'essiccazione
4.1 Strumenti:
Forno di essiccazione termostatico elettrico, uno su diecimila equilibrio.
4.2 Procedura:
In una bottiglia da pesata piatta con coperchio smerigliato, peso costante e sovraessiccazione, pesare 1 grammo di campione (precisione fino a 0,0001 grammi). Il campione deve essere distribuito uniformemente sul fondo della bottiglia di pesatura con uno spessore non superiore a 10 mm, messo in un forno di essiccazione elettrico a temperatura costante, essiccato a 105-110 ℃ per 3 ore, quindi spostato nella stanza di essiccazione, raffreddato a temperatura ambiente e pesato.
Calcolo: Perdita di peso a secco %= (M1-M2) ÷M×100
Dove: M1: massa del campione e della bottiglia da pesare prima dell'essiccazione, g
M2: Massa del campione e della bottiglia di pesata dopo l'essiccazione, g
M: Massa del campione, grammi
5. Rotazione specifica
-- La rotazione specifica viene misurata in conformità con GB/T613-1988
Preparazione del campione: 0,5000 g di campione sono stati pesati accuratamente e trasferiti in una bottiglia volumetrica da 50 ml pulita e asciutta con 20 ml di acetato di etile. La bottiglia è stata tappata e agitata per sciogliere l'acetato di etile.
Test: regolare lo zero del giroscopio prima del test, quindi riempire la provetta con la soluzione campione, registrare l'angolo di deflessione e rotazione e calcolare la rotazione specifica del campione utilizzando la seguente formula.
[α]20/D= (r×50) ÷(L×L)
Dove:
[α]20/D: rotazione specifica della soluzione campione a 25℃
r: Rotazione osservata a 25℃ per la soluzione campione
50: Preparare il volume della soluzione campione (ml)
w: peso del campione (g)
L: Lunghezza del tubo ottico (dm)
6. Analisi TCL
Preparazione del campione: 0,5000 g di campione sono stati pesati accuratamente e spostati in una bottiglia volumetrica da 50 ml pulita e asciutta, sono stati aggiunti 40 ml di EtoH, la bottiglia è stata tappata e agitata per dissolversi, quindi diluita su scala con EtoH.
Preparazione del campione di controllo: 0,5000 g di campione sono stati pesati accuratamente e spostati in una bottiglia volumetrica da 50 ml pulita e asciutta, sono stati aggiunti 40 ml di acqua e 2 gocce di acido cloridrico 6N, la bottiglia è stata tappata e agitata per scioglierla, quindi diluita sulla bilancia con acqua. Quindi prendere 0,5 del liquido di cui sopra e diluirlo con etanolo in una bottiglia da 100 ml fino a ottenere un campione di riferimento con una scala di residui amminoacidici dell'1,0%.
Sono stati prelevati campioni da 10 microlitri con una siringa per microcampionamento e i campioni sono stati posizionati sulla piastra in silicone GF254. Per i punti di confronto sono state prese rispettivamente piastre da 5 microlitri, 10 microlitri e 15 microlitri.
Agente di sviluppo: n-butanolo: acido acetico glaciale: acqua =4:1:1.
Agente di sviluppo del colore: soluzione di ninidrina metanolo al 5%.
Operazione di sviluppo del colore: utilizzare innanzitutto un asciugacapelli per asciugare la piastra di gel di silice sviluppata, quindi immergerla in una soluzione di ninidrina metanolo al 5%, quindi asciugare con l'asciugacapelli e cuocere ad alta temperatura in un forno elettrico per lo sviluppo del colore.
Giudizio: osservare il tempo di colore del prodotto, la dimensione dello spot, la concentrazione del colore e il confronto con il prodotto di controllo, giudicare che rientri in tale intervallo.