Gemcitabina cloridrato
C9H11F2N3O4·HCl 299,66
Citidina, 2′-desossi-2′,2′-difluro-, monocloridrato.
2′-Deossi-2′,2′-difluorocitidina monocloridrato (isomero β-) [122111-03-9].
» La gemcitabina cloridrato contiene non meno del 97,5% e non più del 101,5% di C9H11F2N3O4·HCl, calcolato così com'è.
[Attenzione-La gemcitabina cloridrato è un potente agente citotossico. È necessario prestare la massima attenzione per evitare di inalare particelle e di esporre la pelle ad esse.]
Imballaggio e stoccaggio-Conservare in contenitori stretti.
Etichettatura-Laddove è destinato all'uso nella preparazione di forme di dosaggio iniettabili, l'etichetta indica che è sterile o deve essere sottoposto a ulteriore lavorazione durante la preparazione di forme di dosaggio iniettabili.
Norme di riferimento USP<11>-
USP Citosina RS
USP Endotossina RS
USP Gemcitabina cloridrato RS
Identificazione-
A: Assorbimento degli infrarossi <197K>.
B: Soddisfa i requisiti dei test per Cloruro<191>.
Rotazione specifica<781S>: tra +43 e +50, a 20.
Soluzione di prova: 10 mg per ml.
pH<791>: tra 2,0 e 3,0, in una soluzione contenente 10 mg per mL.
Residuo alla combustione<281>: non più dello 0,1%.
Metalli pesanti, Metodo I<231>: 0,001%.
Purezza cromatografica-
Soluzione A- Procedere come indicato per la fase mobile nel dosaggio.
Soluzione B-Preparare metanolo filtrato e degasato.
Fase mobile-Utilizzare miscele variabili di Soluzione A e Soluzione B come indicato nel sistema cromatografico. Se necessario, apportare le modifiche (vedere Idoneità del sistema in Cromatografia 621).
Soluzione di idoneità del sistema-Procedere come indicato nel test.
Soluzione standard-Sciogliere una quantità accuratamente pesata di USP Gemcitabine Hydrocycloride RS e USP Cytosine RS in acqua e diluire quantitativamente, e gradualmente se necessario, per ottenere una soluzione con una concentrazione nota di circa 2 µg per mL di ciascuno.
Soluzione test-Trasferire circa 50 mg di gemcitabina cloridrato, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 25-mL, sciogliervi e diluire con acqua fino al volume, quindi mescolare.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia 621)-Procedere come indicato in Analisi. Il cromatografo è programmato come segue.
Tempo (minuti) Soluzione A (%) Soluzione B (%) Eluizione
0–8 97 3 isocratico
8–13 97®50 3®50 gradiente lineare
13–20 50 50 isocratico
20–25 50®97 50®3 ri-equilibrio
Cromatografare la soluzione di idoneità del sistema e registrare le risposte di picco come indicato nella Procedura: i tempi di ritenzione relativi sono circa 0,5 per gemcitabina -anomero e 1,0 per gemcitabina; la risoluzione, R, tra l'anomero della gemcitabina e la gemcitabina non è inferiore a 8,0; e il fattore di scodamento per la gemcitabina non è superiore a 1,5. Cromatografare la soluzione Standard e registrare le risposte di picco come indicato nella Procedura: i relativi tempi di ritenzione sono circa 0,1 per la citosina e 1,0 per la gemcitabina; la deviazione standard relativa per le iniezioni ripetute non è superiore al 2,0%.
Procedura-Iniettare separatamente un volume (circa 20 µL) della soluzione standard e della soluzione test nel cromatografo, registrare il cromatogramma e misurare tutte le risposte dei picchi. Calcolare la percentuale di citosina nella porzione di Gemcitabina assunta con la formula:
2,5(Cc/W)(rt/rs)
in cui Cc è la concentrazione di USP Cytosine RS nella soluzione Standard, in µg per mL; W è il peso, in mg, della gemcitabina assunta; rt è la risposta di picco per la citosina nella soluzione Test; e rs è la risposta per la citosina nella soluzione Standard: non si trova più dello 0,1% di citosina. Calcolare la percentuale di ciascuna impurità diversa dalla citosina nella porzione di Gemcitabina assunta con la formula:
2.5(Cs / W)(ri / rs)
in cui Cs è la concentrazione di Gemcitabina cloridrato RS USP nella soluzione standard, in µg per mL; W è il peso, in mg, della gemcitabina assunta; ri è la risposta di picco per ciascuna impurità nella soluzione Test; e rs è la risposta dovuta alla gemcitabina nella soluzione Standard: non viene trovato più dello 0,1% di gemcitabina -anomero o di qualsiasi altra impurezza individuale; e la somma di tutte le impurità non è superiore allo 0,2%. Escludere dalla somma di tutte le impurità eventuali picchi inferiori al limite di quantificazione (0,02%).
Altri requisiti-Quando l'etichetta afferma che la Gemcitabina cloridrato è sterile, soddisfa i requisiti per le endotossine batteriche e la sterilità previsti dalla Gemcitabina iniettabile. Laddove l'etichetta indica che la gemcitabina cloridrato deve essere sottoposta a ulteriore trattamento durante la preparazione delle forme di dosaggio iniettabili, soddisfa i requisiti per le endotossine batteriche in Gemcitabina iniettabile.
Analisi-
Fase mobile-Preparare una soluzione filtrata e degasata contenente 13,8 g di fosfato di sodio monobasico e 2,5 mL di acido fosforico in 1000 mL di acqua. [nota-Il pH di questa soluzione è compreso tra 2,4 e 2,6. ]
Soluzione adatta al sistema-Trasferire circa 10 mg di gemcitabina cloridrato in una piccola fiala, aggiungere 4 mL di una soluzione contenente 168 mg di idrossido di potassio per mL di metanolo, tappare bene e sottoporre a sonicazione. Riscaldare a 55 per 6-16 ore, lasciare raffreddare e trasferire il contenuto in un matraccio tarato da 100-mL con lavaggi successivi di acido fosforico all'1% (v/v). Diluire a volume con acido fosforico all'1% e mescolare. [nota-Questa soluzione contiene circa 0,02 mg per ml di gemcitabina α-anomero.]
Preparazione standard - Sciogliere una quantità accuratamente pesata di gemcitabina cloridrato RS USP in acqua e diluire quantitativamente, e gradualmente se necessario, con acqua per ottenere una soluzione con una concentrazione nota di circa 0,1 mg per ml.
Preparazione del test-Trasferire circa 20 mg di gemcitabina cloridrato, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 200-mL, sciogliervi e diluire con acqua fino al volume, quindi mescolare.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia<621>)-Il cromatografo liquido è dotato di un rilevatore da 275-nm e di una colonna da 4,6-mm × 25-cm che contiene un impaccamento L7 da 5-μm. La portata è di circa 1,2 ml al minuto. Cromatografare la soluzione di idoneità del sistema e registrare le risposte di picco come indicato nella Procedura: la risoluzione, R, tra l'anomero della gemcitabina e la gemcitabina non è inferiore a 8,0; e il fattore di scodamento determinato dalla gemcitabina non è superiore a 1,5. Cromatografare la preparazione dello standard e registrare le risposte di picco come indicato nella procedura: la deviazione standard relativa per le iniezioni replicate non è superiore all'1,0%.
Procedura-Iniettare separatamente volumi uguali (circa 20 µl) della preparazione dello standard e della preparazione del test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le risposte per i picchi principali. Calcolare la quantità, in mg, di C9H11F2N3O4·HCl nella porzione di Gemcitabina Cloridrato assunta con la formula:
200°C(rU/rS)
in cui C è la concentrazione, in mg per ml, di Gemcitabina cloridrato RS USP nella preparazione standard; e rU e rS sono le risposte di picco ottenute rispettivamente dalla preparazione del test e dalla preparazione dello standard.