GENTAMICINA SOLFATO
[1405-41-0]
DEFINIZIONE
Miscela di solfati di sostanze antimicrobiche prodotte da Micromonospora purpurea, i cui componenti principali sono le gentamicine C1, C1a, C2, C2a e C2b.
Contenuto: minimo 590 UI/mg (sostanza anidra).
PERSONAGGI
Aspetto: polvere bianca o quasi bianca, igroscopica.
Solubilità: facilmente solubile in acqua, praticamente insolubile in etanolo (96 %).
IDENTIFICAZIONE
Prima identificazione: B, C.
Seconda identificazione: A, C.
A. Cromatografia su strato sottile (2.2.27).
Soluzione di prova. Sciogliere 25 mg della sostanza da esaminare in acqua R e diluire a 5 mL con lo stesso solvente.
Soluzione di riferimento. Sciogliere il contenuto di una fiala di gentamicina solfato CRS in acqua R e diluire a 5 mL con lo stesso solvente.
Piastra: piastra in gel di silice TLC R.
Fase mobile: lo strato inferiore di una miscela di volumi uguali di ammoniaca concentrata R, metanolo R e cloruro di metilene R.
Applicazione: 10 μL.
Sviluppo: oltre i 2/3 del piatto.
Essiccazione: all'aria.
Rilevazione: spruzzare con soluzione di ninidrina R1 e riscaldare a 110 ℃ per 5 min.
Risultati: i 3 punti principali nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di prova sono simili per posizione, colore e dimensione ai 3 punti principali nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento.
B. Esaminare i cromatogrammi ottenuti nel test per la composizione.
Risultati: il cromatogramma ottenuto con la soluzione di prova (b) mostra 5 picchi principali aventi gli stessi tempi di ritenzione dei 5 picchi principali nel cromatogramma ottenuto con la soluzione di riferimento (a).
C. Dà la reazione (a) dei solfati (2.3.1).
PROVE
Soluzione S. Sciogliere 0,8 g in acqua priva di anidride carbonica R e diluire a 20 mL con lo stesso solvente.
Aspetto della soluzione. La soluzione S è limpida (2.2.1) e non più intensamente colorata dell'intensità 6 della gamma di soluzioni di riferimento del colore più appropriato (2.2.2, Metodo II).
pH (2.2.3): da 3,5 a 5,5 per la soluzione S.
Rotazione ottica specifica (2.2.7): da + 107 a + 121 (sostanza anidra).
Sciogliere 2,5 g in acqua R e diluire a 25,0 mL con lo stesso solvente.
Composizione. Cromatografia liquida (2.2.29): utilizzare la procedura di normalizzazione tenendo conto solo dei picchi dovuti alle gentamicine C1, C1a, C2, C2a e C2b.
Soluzione di prova (a). Sciogliere 25,0 mg della sostanza da esaminare nella fase mobile e diluire a 25,0 mL con la fase mobile.
Soluzione di prova (b). Diluire 5,0 mL della soluzione di prova (a) a 25,0 mL con la fase mobile.
Soluzione di riferimento (a). Sciogliere 5 mg di gentamicina per l'identificazione del picco CRS (contenente impurità B) nella fase mobile e diluire a 25 ml con la fase mobile.
Soluzione di riferimento (b). Sciogliere 20,0 mg di sisomicina solfato CRS (impurezza A) nella fase mobile e diluire a 20,0 ml con la fase mobile.
Soluzione di riferimento (c). Diluire 1,0 mL di soluzione di riferimento (b) a 100,0 mL con la fase mobile.
Soluzione di riferimento (d). A 1 ml di soluzione di riferimento (b), aggiungere 5 ml di soluzione di prova (a) e diluire a 50 ml con la fase mobile.
Colonna:
- dimensioni: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
- fase stazionaria: gel di silice ottadecilsilil per cromatografia R (5 μm);
- temperatura: 35 ℃.
Fase mobile. A 900 mL di acqua priva di anidride carbonica-R, aggiungere 7,0 mL di acido trifluoroacetico R, 250,0 μL di acido pentafluoropropanoico R e 4,0 mL di acido -privo di carbonato
soluzione di idrossido di sodio R, lasciare equilibrare e regolare a pH 2,6 utilizzando la soluzione di idrossido di sodio priva di carbonato R diluita da 1 a 25. Aggiungere 15 ml di acetonitrile R e diluire a
1000,0 mL con anidride carbonica-acqua priva R.
Portata: 1,0 ml/min.
Soluzione post-colonna: soluzione R di idrossido di sodio priva di carbonato-diluita da 1 a 25, precedentemente degasata, che viene aggiunta senza impulsi all'effluente della colonna utilizzando una bobina di miscelazione polimerica da 375 μL.
Portata della soluzione post-colonna: 0,3 mL/min.