Glutatione
C10H17N3O6S 307.32
Acido pentanoico, 2-ammino-5-[(R)-1-(carbossimetilammino)-3-mercapto-1-ossopropano-2-ilammino]-5-osso, (S);
N-(N-l--glutamil-l-cisteinil)glicina [70-18-8].
DEFINIZIONE
Il glutatione contiene NLT 98,0% e NMT 101,0% di C10H17N3O6S, come glutatione, calcolato su base essiccata.
IDENTIFICAZIONE
• A. Assorbimento degli infrarossi<197K>
• B. Rotazione ottica, rotazione specifica<781S>
Soluzione del campione: 40 mg/mL in acqua
Criteri di accettazione: da 15,5° a 17,5°, a 20 ℃
SAGGIO
• Procedura
Campione: 500 mg di glutatione precedentemente essiccato
Sistema titrimetrico
(Vedi Titrimetria<541>.)
Modalità: titolazione diretta
Titolante: 0,1 N iodio VS
Rilevamento endpoint: visivo
Bianco: 50 ml di acido metafosforico (1 su 50)
Analisi: sciogliere il campione in 50 ml di acido metafosforico (1 su 50) e titolare con il titolante.
Calcolare la percentuale di glutatione (C10H17N3O6S) nella porzione di Glutatione assunta:
Risultato = [(V B) × N × F × 100]/W
V = volume titolante del campione (mL)
B = volume titolante del bianco (mL)
N = normalità del titolante (mEq/mL)
F = fattore di equivalenza, 307,32 mg/mEq
W = peso del campione (mg)
Criteri di accettazione: 98,0%~101,0% su base essiccata
IMPURITÀ
Impurezze inorganiche
• Ammonio
Soluzione standard: 10 µg di ammonio da una soluzione diluita di cloruro di ammonio
Soluzione campione: 50 mg di glutatione
Analisi: trasferire la soluzione campione e la soluzione standard in vasetti separati da 25-mL dotati di tappo e scioglierli in 1 mL di acqua. Aggiungere 0,30 g di ossido di magnesio. Richiudere immediatamente dopo aver posizionato sotto i tappi un pezzo di carta argentata al manganese di 5-mm quadrati, bagnata con qualche goccia d'acqua. Agitare evitando proiezioni di liquido e lasciare riposare a 40 per 30 min.
Criteri di accettazione: Se la carta argento manganese presenta un colore grigio, non è più intenso dello standard (NMT 200 ppm).
• Arsenico<211>: NMT 2 ppm
• Cloruro e solfato, cloruro<221>: sciogliere 0,7 g con acqua per ottenere 15 ml. La soluzione non mostra più cloruro di quanto corrisponde a 0,20 mL di acido cloridrico 0,020 N (NMT 200 ppm).
• Cloruro e solfato, solfato 221: sciogliere 0,8 g in acqua per ottenere 15 ml. La soluzione non mostra più solfato di quanto corrisponde a 0,25 mL di acido solforico 0,020 N (NMT 300 ppm).
• Metalli pesanti, Metodo I<231>: NMT 10 ppm
• Ferro<241>: NMT 10 ppm
• Residuo all'accensione<281>: NMT 0,1%
Impurità organiche
• Procedura
Fase mobile: 6,8 g/L di potassio diidrogeno fosfato con 2,02 g/L di sodio 1-eptansolfonato. Regolare con acido fosforico ad un pH di 3,0. Mescolare 970 ml di questa soluzione con 30 ml di metanolo.
Soluzione adatta al sistema: 0,1 mg/ml di USP l-fenilalanina RS, 0,5 mg/ml di glutatione USP RS e 0,5 mg/ml di acido ascorbico USP RS in fase mobile
Soluzione standard: 0,01 mg/mL di Glutatione RS USP in fase mobile. [Nota: questa soluzione ha una concentrazione equivalente al 2,0% di quella della soluzione campione. ]
Soluzione campione: 50 mg di glutatione in 100 mL di fase mobile. [Nota: lasciare riposare la soluzione per 5 minuti prima dell'uso. ]
Sistema cromatografico
(Vedere Cromatografia<621>, Idoneità del sistema.)
Modalità:LC
Rivelatore: UV 210 nm
Colonna: 4,6-mm × 15-cm; 5-μm imballaggio L1
Temperatura della colonna: 30
Portata: regolare in modo che il tempo di ritenzione del glutatione sia di circa 5 minuti.
Dimensione dell'iniezione: 10 µl
Idoneità del sistema
Esempio: soluzione di idoneità del sistema
Requisiti di idoneità
Risoluzione: NLT 5.0 tra i picchi dell'acido ascorbico e del glutatione; e NLT 5.0 tra i picchi del glutatione e della l-fenilalanina
Deviazione standard relativa: NMT 1,5% per iniezioni replicate
Analisi
Campioni: soluzione standard e soluzione campione
Calcolare la percentuale di eventuali impurità presenti nella porzione di Glutatione assunta:
Risultato = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = risposta di picco di qualsiasi picco della soluzione campione diversa dal glutatione
rS = risposta del picco del glutatione dalla soluzione standard
CS = concentrazione di glutatione USP RS nella soluzione standard (mg/mL)
CU = concentrazione di glutatione nella soluzione campione (mg/mL)
Criteri di accettazione
Impurezza individuale: NMT 1,5% per l'impurezza con relativo tempo di ritenzione di circa 4
Impurezze totali: NMT 2,0%
TEST SPECIFICI
• Chiarezza e colore della soluzione
Soluzione del campione: 0,1 g/mL in acqua
Analisi: Utilizzando tubi identici di vetro incolore, trasparente, neutro, con fondo piatto e diametro interno di 15-25 mm, confrontare il liquido da esaminare con acqua, la profondità dello strato è di 40 mm. Confronta i colori alla luce del giorno diffusa, osservando verticalmente su uno sfondo bianco.
Criteri di accettazione: La soluzione è limpida e incolore.
• Perdita all'asciugatura<731>: NMT 0,5%, 105℃ per 3 ore
REQUISITI AGGIUNTIVI
• Imballaggio e conservazione: conservare in contenitori stretti.
• Standard di riferimento USP<11>
Acido ascorbico USP RS
Glutatione USP RS
USP l-Fenilalanina RS