Selenometionina
C5H11NO2Se 196.11
Acido (S)-2-ammino-4-(metilselenil)butirrico [1464-42-2].
DEFINIZIONE
La selenometionina contiene NLT 97,0% e NMT 103,0% di selenometionina (C5H11NO2Se) e contiene NLT 39,0% e NMT 41,0% di selenio (Se), calcolati così come sono.
IDENTIFICAZIONE
• A. Assorbimento degli infrarossi<197K>
SAGGIO
• Procedura
Fase mobile: 6,8 g/L di fosfato di potassio monobasico in acqua. Regolare con acido fosforico ad un pH di 2,75 ± 0,25.
Soluzione adatta al sistema: 0,16 mg/ml di selenometionina RS USP e 0,8 mg/ml di L-metionina RS USP in fase mobile
Soluzione standard: 0,16 mg/mL di Selenometionina RS USP in fase mobile
Soluzione campione: 0,16 mg/mL di Selenometionina in fase Mobile con sonicazione. Passare attraverso un filtro a membrana con pori di 0,45-μm.
Sistema cromatografico
(Vedere Cromatografia<621>, Idoneità del sistema.)
Modalità:LC
Rivelatore: UV 220 nm
Colonna: 4,6-mm × 25-cm; imballaggio L1 con copertura -terminale polare
Velocità di flusso: 1 ml/min
Dimensione dell'iniezione: 20 µl
Idoneità del sistema
Esempio: soluzione di idoneità del sistema
[Nota-I tempi di ritenzione relativi per metionina e selenometionina sono rispettivamente 0,8 e 1,0.]
Requisiti di idoneità
Risoluzione: NLT 3.0 tra metionina e selenometionina
Fattore di scodamento: NMT 2.0 per il picco della selenometionina
Deviazione standard relativa: NMT 2,0% per il picco della selenometionina
Analisi
Campioni: soluzione standard e soluzione campione
Calcolare la percentuale di selenometionina (C5H11NO2Se) nella porzione di Selenometionina assunta:
Risultato = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU= risposta di picco dalla soluzione campione
rS= risposta di picco dalla soluzione Standard
CS= concentrazione di selenometionina RS USP nella soluzione standard (mg/mL)
CU= concentrazione di selenometionina nella soluzione campione (mg/mL)
Criteri di accettazione: 97,0%-103,0% così com'è
IMPURITÀ
• Metalli pesanti, Metodo I<231>: NMT 20 ppm
• Limite di sodio
Soluzione madre standard: 10 µg/mL di sodio da cloruro di sodio, precedentemente essiccato a 105 per 2 ore
Soluzioni standard: 0,2, 0,5 e 1,0 µg/mL di sodio. Pipettare 2,0, 5,0 e 10,0 mL di soluzione madre standard in matracci volumetrici separati da 100-mL. A ciascuna beuta aggiungere 2,0 mL di soluzione di cloruro di potassio (1 su 5) e 1,0 mL di acido cloridrico e diluire con acqua a volume.
Soluzione campione: trasferire 100 mg di selenometionina in un matraccio tarato da 100-mL, aggiungere 2,0 mL di soluzione di cloruro di potassio (1 su 5) e 1,0 mL di acido cloridrico e diluire con acqua a volume.
Condizioni strumentali
(Vedi Spettrofotometria e luce-Diffusione<851>.)
Modalità: Spettrofotometria di assorbimento atomico
Lunghezza d'onda analitica: 589 nm
Lampada: catodo cavo - di sodio
Fiamma: aria-acetilene
Analisi
Campioni: soluzioni standard e soluzione campione
Determinare le assorbanze delle soluzioni. Tracciare le assorbanze delle soluzioni standard rispetto alle loro concentrazioni (μg/mL di sodio) e tracciare la linea retta che meglio si adatta ai punti tracciati. Dal grafico così ottenuto, determinare la concentrazione di sodio, CNa (μg/mL), nella soluzione Campione.
Calcolare la percentuale di sodio nella porzione di Selenometionina assunta:
Risultato = (CNa/CSA) × F × 100
CNa= concentrazione di sodio nella soluzione campione (μg/mL), determinata dalla retta di regressione
CSA= concentrazione di selenometionina nella soluzione campione (mg/mL)
F= fattore di conversione, 0,001 mg/μg
Criteri di accettazione: NMT 0,1%
• Purezza cromatografica
Soluzione standard A: trasferire 50 mg di selenometionina RS USP in un matraccio tarato da 10-mL, aggiungere 2 mL di acqua, scaldare per sciogliere se necessario e diluire con metanolo fino al volume.
Soluzione standard B: trasferire 1,0 mL della soluzione standard A in un matraccio tarato da 100-mL e diluire con metanolo fino al volume.
Soluzione campione: trasferire 50 mg di selenometionina in un matraccio tarato da 10-mL, aggiungere 2 mL di acqua, scaldare per sciogliere se necessario e diluire con metanolo a volume.
Sistema cromatografico
(Vedere Cromatografia<621>, Idoneità del sistema.)
Modalità: TLC
Assorbente: strato di 0,25-mm di miscela cromatografica di gel di silice
Volume di applicazione: 10 µl
Solvente di sviluppo: butanolo, acido acetico glaciale e acqua (4:1:1)
Reagente spray: 2 mg/mL di ninidrina in alcool
Analisi
Campioni: soluzione standard A, soluzione standard B e soluzione campione
Procedere come indicato per Cromatografia<621>, Cromatografia su strato sottile. Lasciare asciugare le macchie e sviluppare il cromatogramma nel solvente di sviluppo finché il fronte del solvente non si è spostato di tre quarti della lunghezza della piastra. Rimuovere la piastra dalla camera di sviluppo, contrassegnare il fronte del solvente e lasciare evaporare il solvente. Individuare le macchie sulla piastra spruzzando con il reagente Spray e asciugandolo a 110 per 10 minuti.
Criteri di accettazione: NMT 1,0%. Il valore RF dello spot principale della Soluzione Campione corrisponde a quello della Soluzione Standard A; e nessun punto, tranne il punto principale della soluzione campione, è più grande o più intenso del punto principale della soluzione standard B.
TEST SPECIFICI
• Rotazione ottica, rotazione specifica<781S>
Soluzione campione: 10 mg/mL in acido cloridrico 1 N
Criteri di accettazione: da +17,0 a +19,5
• Contenuto di selenio
[Attenzione-Il selenio è tossico; maneggiatelo con cura.]
Soluzione madre standard: sciogliere 1 g di selenio metallico in un volume minimo di acido nitrico. Evaporare a secchezza, aggiungere 2 ml di acqua ed evaporare a secchezza. Ripetere per tre volte l'aggiunta dell'acqua e l'evaporazione a secchezza. Sciogliere il residuo in acido cloridrico 3 N, trasferirlo in un matraccio tarato da 1000-mL e diluire con acido cloridrico 3 N a volume. Questa soluzione contiene 1000 µg/mL di selenio.
Soluzioni standard: 20, 50 e 100 µg/mL di selenio. Pipettare 2,0, 5,0 e 10,0 mL di soluzione madre standard in matracci volumetrici separati da 100-mL. Diluire il contenuto di ciascun pallone con acqua a volume.
Soluzione campione: 0,125 mg/mL di Selenometionina in acqua
Condizioni strumentali
(Vedi Spettrofotometria e luce-Diffusione<851>.)
Modalità: Spettrofotometria di assorbimento atomico
Lunghezza d'onda analitica: 196 nm
Lampada: catodo cavo - di selenio
Fiamma: Aria-Acetilene
Vuoto: Acqua
Analisi
Campioni: soluzioni standard e soluzione campione
Determinare le assorbanze delle soluzioni. Tracciare le assorbanze delle soluzioni standard rispetto alle loro concentrazioni (μg/mL di selenio) e tracciare la linea retta che meglio si adatta ai punti tracciati. Dal grafico così ottenuto, determinare la concentrazione di selenio, CSe (μg/mL), nella soluzione Campione.
Calcolare la percentuale di selenio nella porzione di Selenometionina assunta:
Risultato = (CSe/CSA) × F × 100
CSe= concentrazione di selenio nella soluzione campione (μg/mL), determinata dalla retta di regressione
CSA= concentrazione di selenometionina nella soluzione campione (mg/mL)
F= fattore di conversione, 0,001 mg/μg
Criteri di accettazione: 39,0%-41,0% così com'è
REQUISITI AGGIUNTIVI
• Imballaggio e conservazione: conservare in contenitori ben chiusi.
• Standard di riferimento USP<11>
USP L-Metionina RS
USP Selenometionina RS