DEFINIZIONE
Il succinato di polietilene glicole della vitamina E è una miscela formata dall'esterificazione del succinato dell'acido d-alfa tocoferilico e del glicole polietilenico. La miscela di esteri è costituita principalmente da polietilenglicole mono-esterificato e da una piccola quantità di polietilenglicole di-esterificato. Contiene NLT 25,0% di d-alfa tocoferolo (C29H50O2).
IDENTIFICAZIONE
• A. Test di identificazione gascromatografica
Analisi: procedere come indicato nel test per il contenuto di alfa tocoferolo.
Criteri di accettazione: Il tempo di ritenzione del picco maggiore della soluzione Campione corrisponde a quello della soluzione Standard.
COMPOSIZIONE
• Contenuto di alfa tocoferolo
Solvente: 0,25 mL di fenolftaleina TS in 1 L di alcol
Soluzione standard interna: 12 mg/mL di arachidato di etile in isoottano
Soluzione standard: trasferire 32,5 mg di USP Alpha Tocopherol RS in un pallone di reazione adatto. Aggiungere 2 mL di piridina e 0,5 mL di N,O-bis(trimetilsilil)trifluoroacetammide con trimetilclorosilano all'1% e riscaldare il pallone a 100 per 10 min. Raffreddare il pallone, aggiungere 5,0 ml di soluzione standard interna seguiti da 20 ml di isoottano e agitare.
Soluzione campione: trasferire una quantità equivalente a 0,100–0,160 g di vitamina E polietilenglicole succinato fuso a 60°C in una provetta di coltura (lunga circa 20 cm e con un diametro di 2,5 cm) dotata di tappo a vite. Aggiungere 40–50 mg di acido ascorbico e qualche pezzetto bollente, seguiti da 20 ml di solvente. [Nota - Far rifluire delicatamente la soluzione senza fuoriuscita di contenuto.] Posizionare la provetta in un blocco riscaldante impostato a 100–150. Quando il campione è completamente sciolto, aggiungere 0,25 g di idrossido di potassio e continuare a riflusso per 30 minuti. Togliere la provetta dal fuoco e, mentre il contenuto è ancora caldo, aggiungere goccia a goccia 1–2 ml di acido cloridrico finché la colorazione rosa non scompare. [Attenzione-Reazione esotermica. Lasciare che l'acido goccioli all'interno della provetta per evitare schizzi.] Raffreddare la provetta, quindi lavare i lati della provetta con 20 ml di acqua. Aggiungere 5,0 ml di soluzione standard interna, tappare e agitare per garantire una miscelazione completa. Lasciare riposare il tubo finché non si saranno formati due strati distinti. Trasferire 2,5–3,5 mL dello strato superiore in un pallone di reazione adatto e aggiungere 2,0 mL di piridina seguiti da 2,5 mL di N,O-bis(trimetilsilil)trifluoroacetammide con 1% di trimetilclorosilano. Riscaldare il pallone a 100 per 10 min. Raffreddare e quindi aggiungere 12 ml di isoottano.
Sistema cromatografico
(Vedere Cromatografia 621, Idoneità del sistema.)
Modalità: GC
Rivelatore: Ionizzazione di fiamma
Colonna: 0,25-mm × 15-m capillare-di silice fusa; rivestito con un film di 0,25-μm di fase G27
Temperatura
Iniettore: 280
Rivelatore: 345
Colonna: vedere la tabella 1.
Tabella 1
Temperatura iniziale (°) Rampa di temperatura (°/min) Temperatura finale (°) Tempo di mantenimento alla temperatura finale (min)
260 20 340 1
Gas di trasporto: elio
Portata: 1,5 ml/min
Dimensione dell'iniezione: 1 µl
Tipo di iniezione: rapporto di ripartizione, 200:1
Idoneità del sistema
Campione: soluzione standard
Requisiti di idoneità
Fattore di scodamento: NMT 2.0 per il picco dell'alfa tocoferolo
Deviazione standard relativa: NMT 2,0% per il rapporto tra l'area del picco dell'alfa tocoferolo e l'area del picco dello standard interno
Analisi
Campioni: soluzione standard e soluzione campione
Calcolare la percentuale di d-alfa tocoferolo (C29H50O2) nella porzione di Vitamina E Polietilenglicole Succinato assunta:
Risultato = (RU/RS) × (WS/WU) × 100
RU= rapporto dello standard interno (area del picco dell'alfa tocoferolo/area del picco dello standard interno) dalla soluzione campione
RS= rapporto dello standard interno (area del picco dell'alfa tocoferolo/area del picco dello standard interno) dalla soluzione standard
WS= peso dell'alfa tocoferolo RS USP utilizzato per preparare la soluzione standard (mg)
WU= peso del glicole polietilenico succinato di vitamina E prelevato per preparare la soluzione campione (mg)
Criteri di accettazione: NLT 25,0%
TEST SPECIFICI
• Rotazione ottica, rotazione specifica 781S
[Nota-Questo test identifica il d-alfa tocoferolo dopo la saponificazione.]
Soluzione campione: trasferire 0,9 g di polietilenglicole succinato di vitamina E, fuso a 60, in una provetta adatta dotata di tappo e sciogliere in 10,0 ml di alcol. Posizionare la provetta in un blocco riscaldante impostato su 100–105. [Nota-Far rifluire delicatamente la soluzione senza fuoriuscita di contenuto. ] Quando il campione è completamente sciolto, aggiungere 2–3 pellet di idrossido di sodio e continuare a rifluire per altri 30 minuti. Togliere la provetta dal fuoco e, mentre il contenuto è ancora caldo, neutralizzare utilizzando la fenolftaleina come indicatore aggiungendo lentamente 10 ml di una miscela di acqua e acido cloridrico (1:1) fino alla scomparsa del colore rosa. [Attenzione-Reazione esotermica. Lasciare che la soluzione acida coli all'interno della provetta per evitare schizzi.] Raffreddare la provetta, tappare e agitare finché i contenuti non sono ben miscelati. Aggiungere 25,0 ml di eptano, tappare e agitare per 1 minuto per garantire una miscelazione completa. Lasciare riposare il tubo finché non si saranno formati due strati distinti. Trasferire lo strato superiore in una provetta di coltura pulita e asciutta, quindi aggiungere 10,0 ml di acqua alla soluzione recuperata. Tappare, agitare e consentire agli strati di separarsi. Trasferire lo strato superiore in un tubo pulito e asciutto. Aggiungere 10,0 mL di soluzione di ferricianuro di potassio, preparata sciogliendo 2 g di ferricianuro di potassio in 10,0 mL di idrossido di sodio 0,2 M, e rimettere il tappo. Agitare vigorosamente per 45 secondi e consentire agli strati di separarsi per 30 minuti. Se lo strato superiore di eptano risulta limpido procedere con la misurazione per rotazione specifica; se non è limpido, essiccarlo su solfato di sodio anidro prima di procedere con il test. [Nota-Utilizzare i risultati del test per il contenuto di alfa tocoferolo per calcolare la rotazione specifica.]
Criteri di accettazione: NLT +24.0
• Solubilità in acqua
Campione: 20 g di polietilenglicole succinato di vitamina E fuso
Analisi: posizionare il campione in un contenitore di vetro su un agitatore magnetico. Aggiungere immediatamente 80 ml di acqua bollente mescolando. Lasciare raffreddare a temperatura ambiente mescolando continuamente.
Criteri di accettazione: la soluzione diventa limpida entro 3 ore.
• Valore acido
Campione: 1 g di polietilenglicole succinato di vitamina E
Analisi: sciogliere il campione in 25 mL di una miscela di alcol ed etere (1:1) che è stata neutralizzata in fenolftaleina con idrossido di sodio 0,1 N. Aggiungere 0,5 mL di fenolftaleina TS e titolare con idrossido di sodio 0,10 N fino a quando la soluzione rimane leggermente rosa dopo aver agitato per 30 s.
Criteri di accettazione: NMT 0,027 mEq/g, equivalente a NMT 0,27 mL di idrossido di sodio 0,10 N
REQUISITI AGGIUNTIVI
• Imballaggio e conservazione: conservare in contenitori stretti e conservare al riparo dalla luce.
• Etichettatura: L'etichetta indica il contenuto di d-alfa tocoferolo, espresso in mg/g.
• Standard di riferimento USP 11
USP Alfa Tocoferolo RS