Xilazina
C12H16N2S220.34
4H-1,3-tiazina-2-ammina, N-(2,6-dimetilfenil)-5,6-diidro-.
5,6-Diidro-2-(2,6-xilidino)-4H-1,3-tiazina [7361-61-7].
» La xilazina contiene non meno del 98,0% e non più del 102,0% di C12H16N2S.
Imballaggio e stoccaggio- Conservare in contenitori stretti. Rimessa alle 25, escursioni consentite dalle 15 alle 30.
Etichettatura- Se è destinato esclusivamente all'uso veterinario, l'etichetta lo indica.
Norme di riferimento USP<11>
USP Xilazina RS
Identificazione-
A: Assorbimento degli infrarossi <197K>.
B: Assorbimento ultravioletto<197U>-
Soluzione: 5 µg per ml.
Mezzo: acido cloridrico 0,1 N.
C: Test di identificazione cromatografica su strato sottile<201>-
Soluzione test: 2 mg per ml, in cloroformio.
Sistema solvente di sviluppo: acetone, cloroformio e metanolo (2:1:1).
Procedura- Prima dell'applicazione della Soluzione Test e della Soluzione Standard, asciugare la piastra a 10°C per non meno di 30 minuti e lasciarla raffreddare in essiccatore. Lasciare asciugare le applicazioni con l'ausilio di una corrente d'aria calda e svilupparle. Esaminare con luce UV a lunghezza d'onda corta: la dimensione, l'intensità e il valore RF dello spot principale ottenuto dalla soluzione Test corrispondono a quelli dello spot principale ottenuto dalla soluzione Standard.
Intervallo di fusione<741>: tra 136 e 142.
Perdita all'essiccazione<731>- Asciugarlo sotto vuoto a 60 per 4 ore: perde non più dello 0,5% del suo peso.
Residuo alla combustione<281>: non più dello 0,1%.
Metalli pesanti, Metodo II<231>: 20 µg per g.
Limite di 3-ammino-1-propanolo- Preparare una soluzione di prova di xilazina in metanolo contenente 100 mg per mL, utilizzando la sonicazione per ottenere la dissoluzione. Preparare una soluzione standard di 3-ammino-1-propanolo in metanolo contenente 0,5 mg per mL. Applicare separatamente 5 µl della soluzione di test e della soluzione standard su una piastra cromatografica a strato sottile (vedere Cromatografia<621>) rivestita con uno strato di gel di silice cromatografico da 0,25 mm. Lasciare asciugare le applicazioni e sviluppare i cromatogrammi in una camera cromatografica satura, contenente un sistema solvente costituito da una miscela di alcol e idrossido di ammonio (80:20) finché il fronte del solvente non si è spostato per circa tre quarti della lunghezza della piastra. Rimuovere la piastra dalla camera cromatografica, contrassegnare il fronte del solvente e asciugare la piastra all'aria. Spruzzare la piastra con una soluzione alcolica di ninidrina (1 su 500) e scaldare immediatamente la piastra in forno a 105. Quando le macchie saranno visibili, togliere la piastra dal forno e lasciarla raffreddare. Esaminare i cromatogrammi e confrontare le intensità delle macchie corrispondenti a 3-ammino-1-propanolo: l'intensità della macchia di 3-ammino-1-propanolo ottenuta dalla soluzione in esame non è maggiore di quella della macchia di 3-ammino-1-propanolo ottenuta dalla soluzione standard (0,5%).
Limite di acetone e alcol isopropilico-
Diluente- Diluire 15 ml di acido acetico glaciale con acqua fino a 1000 ml e mescolare.
Soluzione standard- Trasferire 10,0 µl ciascuno di acetone e alcool isopropilico in un matraccio tarato da 500-mL, diluire con il diluente a volume e mescolare. Questa soluzione contiene 15,8 µg di acetone per ml e 15,7 µg di alcol isopropilico per ml.
Soluzione di prova- Trasferire circa 100 mg di xilazina, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 10 ml, sciogliervi e diluire con il diluente a volume, quindi mescolare.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia<621>)- Il gascromatografo è dotato di un rilevatore a ionizzazione di fiamma e di una colonna da 2-mm × 1,8-m impaccata con fase G25 allo 0,1% su 80- a 100-supporto mesh S7. Come gas di trasporto viene utilizzato l'elio con una portata di circa 30 ml al minuto. Le temperature della porta di iniezione e del rivelatore vengono mantenute rispettivamente a circa 240 e 275. Il sistema è programmato secondo i seguenti passaggi. La temperatura della colonna viene mantenuta a 30 per 6 minuti dopo ciascuna iniezione, quindi aumentata a 100 ad una velocità di 10 al minuto, quindi aumentata ulteriormente a 220 ad una velocità di 15 al minuto e mantenuta per 10 minuti. Cromatografare la soluzione Standard e registrare le risposte dei picchi come indicato nella Procedura: i relativi tempi di ritenzione sono circa 0,75 per l'acetone e 1,0 per l'alcol isopropilico; la risoluzione, R, tra acetone e alcol isopropilico non è inferiore a 2,0; il fattore di scodamento determinato da ciascun picco dell'analita non è superiore a 2,0; e la deviazione standard relativa per le iniezioni ripetute non è superiore al 2,0%.
Procedura- Iniettare separatamente volumi uguali (circa 2 µL) della soluzione standard e della soluzione test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le aree dei picchi principali. Calcolare le percentuali di acetone e alcol isopropilico nella porzione di Xilazina presa dalla formula:
(C/W)(rU / rS)
dove C è la concentrazione, in µg per mL, di acetone o alcool isopropilico in ogni mL della soluzione Standard; W è il peso, in mg, della Xilazina prelevata per preparare la Soluzione Test; e rU e rS sono le risposte per il relativo picco dell'analita ottenuto rispettivamente dalla soluzione Test e dalla soluzione Standard: non si trovano più dello 0,02% di acetone e non più dello 0,2% di alcol isopropilico.
Purezza cromatografica-
Soluzione A, Soluzione B, Fase mobile e Diluente- Procedere come indicato nel dosaggio.
Soluzione standard- Diluire quantitativamente un volume accuratamente misurato della preparazione standard preparata nel test con diluente per ottenere una soluzione avente una concentrazione di 0,008 mg di xilazina RS USP per mL.
Soluzione di prova- Trasferire circa 100 mg di xilazina, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 10 ml, aggiungere 5,0 ml di soluzione B e agitare per sciogliere. Aggiungere circa 4 ml di soluzione A e agitare. Diluire con la Soluzione A a volume e mescolare.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia<621>)- Il cromatografo liquido è dotato di un rilevatore da 205-nm e di una colonna da 4,6-mm × 25-cm che contiene l'impaccamento L7 e una colonna di guardia. La portata è di circa 1 ml al minuto. Equilibrare la colonna con una fase mobile costituita dal 75% di soluzione A e dal 25% di soluzione B. Mantenere questa composizione per 8 minuti dopo ciascuna iniezione, dopodiché la proporzione della soluzione B viene aumentata linearmente dal 25% al ​​70% in un periodo di 27 minuti e mantenuta a tale composizione per 5 minuti; quindi aumentare rapidamente la proporzione della soluzione A al 75% prima dell'iniezione successiva. Cromatografare la soluzione standard e registrare le risposte di picco come indicato nella procedura: il fattore di scodamento non è superiore a 1,5; e la deviazione standard relativa per le iniezioni ripetute non è superiore al 5,0%.
Procedura- Iniettare separatamente volumi uguali (circa 10 µL) della soluzione standard e della soluzione test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le aree dei picchi principali. Calcolare la percentuale di ciascuna impurità nella Xilazina presa dalla formula:
1000(C/W)(ri F/rS)
in cui C è la concentrazione, in mg per mL, di Xilazina RS USP nella soluzione Standard; W è il peso, in mg, della Xilazina prelevata per preparare la Soluzione Test; ri è la risposta di ogni singolo picco di impurità nel cromatogramma della soluzione Test che non è presente nel cromatogramma del Diluente; F è il fattore di risposta di 0,72 per il picco della 2,6-dimetilanilina con un tempo di risposta di circa 0,8 rispetto al tempo di ritenzione della xilazina, di 0,36 per un'impurezza con un tempo di ritenzione relativo di circa 1,3, 0,37 per 2,6-dimetilfenil isotiocianato con un tempo di ritenzione relativo di circa 2, e 1,0 per qualsiasi altra impurezza; e rS è la risposta del picco della xilazina nel cromatogramma della soluzione Standard: non si trova più dello 0,5% di ogni singola impurità; e la somma di tutte le impurità trovate non è superiore all'1%.
Analisi-
Soluzione A- Sciogliere 3,03 g di sodio 1-eptansolfonato in 800 mL di acqua, regolare con acido solforico 2 N a pH 3,0, diluire con acqua a 1000 mL e mescolare. Passare attraverso un filtro con porosità pari o inferiore a 0,5-μm.
Soluzione B- Usa l'acetonitrile.
Fase mobile- Utilizzare miscele variabili di Soluzione A e Soluzione B come indicato per il sistema cromatografico.
Diluente- Preparare una miscela di Soluzione A e Soluzione B (50:50).
Preparazione standard- Preparare una soluzione di USP Xylazina RS nel diluente avente una concentrazione nota di circa 0,4 mg per ml.
Preparazione del test- Trasferire circa 10 mg di xilazina, accuratamente pesati, in un matraccio tarato da 25 ml, diluire con il diluente a volume e mescolare.
Sistema cromatografico (vedi Cromatografia<621>)- Il cromatografo liquido è dotato di un rilevatore da 226-nm e di una colonna da 3,9-mm × 30-cm che contiene l'impaccamento L1. La portata è di circa 1 ml al minuto. Equilibrare la colonna con una fase mobile costituita dal 70% di soluzione A e dal 30% di soluzione B. Mantenere questa composizione per 5 minuti dopo ogni iniezione, dopodiché la proporzione della soluzione B viene aumentata linearmente dal 30% al 40% in un periodo di 5 minuti e mantenuta a tale composizione per 5 minuti; quindi aumentare rapidamente la proporzione della soluzione A al 70% prima dell'iniezione successiva. Cromatografare la preparazione dello standard e registrare le risposte di picco come indicato nella procedura: il fattore di scodamento non è superiore a 2,0; e la deviazione standard relativa per le iniezioni ripetute non è superiore al 2,0%.
Procedura- Iniettare separatamente volumi uguali (circa 10 µl) della preparazione dello standard e della preparazione del test nel cromatografo, registrare i cromatogrammi e misurare le aree dei picchi principali. Calcolare la quantità, in mg, di C12H16N2S nella porzione di Xilazina presa dalla formula:
25C(RU/RS)
in cui C è la concentrazione, in mg per mL, di Xilazina RS USP nella preparazione Standard; e rU e rS sono le risposte del picco della xilazina ottenute rispettivamente dalla preparazione del test e dalla preparazione dello standard.